کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (High Efficiency Liquid Cgromotography (HPLC
اطلاعات اولیه
کروماتوگرافی مایع با عملکرد بالا بدون سؤال ، سریع‌ترین رشد را در بین تمام
روش‌های جداسازی تجزیه‌ای با فروش سالیانه در گستره بیلیون دلار داشته است. دلایل این رشد انفجارآمیز عبارت‌اند از حساسیت روش ، سازگاری سریع آن برای انجام اندازه‌گیری‌های کمی صحیح ، شایستگی آن برای جداسازی مواد گونه‌های غیرفرار یا ناپایدار در مقابل
گرما و مهم‌تر از همه ، کاربرد گسترده آن برای موادی است که در صنعت ، زمینه‌های مختلفی علوم و جامعه اهمیت درجه اول را دارند.
کارایی ستون HPLC
کار این ستون نیز به اندازه ذرات داخل ستون بستگی دارد. هرچه اندازه ذرات کوچک‌تر باشد، کارایی HPLC پیشتر می‌شود.
فاز ساکن و فاز متحرک
در مورد فازهای ساکن و متحرک یک قاعده کلی وجود دارد آن این است که باید قطبیت حل شونده و فاز متحرک نزدیک به هم باشد. ولی با فاز ساکن اختلاف داشته باشد. ترتیب قطبیت گرده‌های عاملی در ترکیبات به صورت زیر است:
به عنوان مثال فاز ساکن با قطبیت بالا مثل
سیلیکات یا
آلومین یا مایعات قطبی مثل
تری اتیلن گلیگول که روی ذرات سیلیکات قرار گرفته‌اند و فاز متحرک حلال نسبتا غیر قطبی مثل هگزان یا
ایزو پروپیل اتر را می‌توان نام برد.
خصوصیات فاز متحرک ( HPLC )
مزایای HPLC
کاربرد HPLC برای مواد غیر فرار به قرار زیر می‌باشد. از ستون‌های طولانی که
سرعت حلال در تمام طول آنها نزدیک به مطلوب‌ترین سرعت باشد، می‌توان استفاده کرد و امکان تغییر دادن ماهیت فاز متحرک برای انجام شستشوی تدریجی و شستشوی مرحله‌ای یا هر دو وجود دارد.
آشکارسازهای مورد استفاده در
کروماتوگرافی مایع - مایع تمام خصوصیات
آشکارسازهای کروماتوگرافی گازی را دارند، بجز اینکه در
آشکارساز کروماتوگرافی مایع نیازی به محدوده دمایی بالا نیست. این شناساگرها کلا دو دسته‌اند:
- یک نوع کلی که به فاز متحرک عکس‌العمل نشان می‌دهند.
- نوع خاصی که به حل شونده حساس هستند.
مقایسه با کروماتوگرافی گازی
- آشکارسازهای کروماتوگرافی مایع معمولا خیلی گران‌تر و بعضی مواقع از نظر کاربرد محدودتر از آشکارسازهای کروماتوگرافی گازی می‌باشند. حدود آشکارسازی این آشکارسازها هنوز به حدود تشخیص حساس‌ترین آشکارسازهای یونش که در کروماتوگرافی گازی به کار می‌روند، نمی‌رسد.
- سرعت‌های نفوذ در سیستم‌های گازی است. بنابراین سرعت‌های انتقال جرم بین فازهای ساکن و متحرک آهسته‌تر است و سرعتی را که با آن ستون می‌تواند عمل نموده و به شرایط تعادل برسد، محدود می‌کند.
همچنین ماهیت فاز متحرک که معمولا می‌تواند به طور نسبتا قوی با فاز ساکن وارد عمل متقابل شود، بر قراری تعادل بین فاز ساکن و متحرک را پیچیده می‌سازد. با این حال این برهمکنش را می‌توان در بعضی از حالت‌ها مانند شستشوی تدریجی ، به عنوان مزیت تلقی کرد.
کاربردهای HPLC
کاربرد گسترده آن برای موادی است که در صنعت ، زمینه‌های مختلف علوم و جامعه اهمیت درجه اول را دارند. مثال‌هایی از این موارد عبارت‌اند از :
اسیدهای آمینه ،
پروتئین‌ها ،
اسیدهای نوکلئیک ،
هیدروکربن‌ها ، هیدرات‌های کربن ، داروها ، ترپنوئیدها،
حشره‌کش‌ها ،
آنتی‌بیوتیکها ، استروپیدها ، گونه‌های آلی و گروهی از مواد گوناگون معدنی.
مباحث مرتبط با عنوان
